Иммуноферментный анализ
Иммуноферментные методы исследования крови, в основе которых лежит специфическая реакция антиген-антитело, интенсивно развивались в течение последних трех десятилетий. За это время они прошли путь от диагностики отдельных заболеваний в специализированных лабораториях до рутинного определения большого количества аллергенов, возбудителей бактериальных и вирусных инфекций, уровня гормонов, маркеров; онкологических, сердечно-сосудистых заболеваний и других показателей. Новейшей технологией в этой области, все более активно используемой впоследние годы, является мультиплексный иммуноферментный анализ. Метод позволяет одновременно определять несколько параметров в одном образце крови небольшого объема. Это дает возможность исследовать не только концентрацию отдельных белков (ферментов, гормонов, сигнальных белков и др.), но и их взаимодействие, следить за образованием аутоантител, определять специфичность антител, идентифицировать модификации белков и изучать их взаимодействие с малыми молекулами. Такой анализ крови на определение вирусных инфекций применяется практически во всех направлениях медицины, например в стоматологии является необходимым при подготовке к имплантации зубов.
ПЦР (полимеразная цепная реакция)
Метод ПЦР является классикой анализа ДНК. Он позволяет специфично увеличивать (амплифицировать) количество ДНК исследуемого образца в миллиарды раз и теоретически делает возможным определить даже 1 копию ДНК, не имея, по сути, пределов чувствительности. Помимо абсолютной чувствительности для ПЦР характерна абсолютная специфичность, то есть метод не дает ложноположительных результатов. Казалось бы, как можно модернизировать столь совершенный метод. Однако ученые нашли выход из этой ситуации. И в настоящее время в практику внедряется новая технология – ПЦР в режиме реального времени. Ее принципиальной особенностью является количественный анализ накапливаемых в ходе реакции продуктов, а также автоматическая регистрация и интерпретация полученных данных. Кроме того, при проведении реакции в режиме реального времени устраняется такой этап исследования, как электрофорез, что снижает требования, предъявляемые к лаборатории, и повышает доступность исследования.
ПЦР-технологии в настоящее время используются не только для диагностики уже существующих заболеваний, но и для выявления наследственной предрасположенности к ним. Для каждого человека возможно составление генетического паспорта здоровья. Изучение ДНК позволяет обнаружить индивидуальную предрасположенность к сахарному диабету;мгипертонической болезни; язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки. Выявленные неблагоприятные наследственные факторы – это шанс предотвратить заболевание или отложить появление его первых симптомов на долгие годы. Ведь у человека появляется время изменить образ жизни, провести все необходимые обследования и профилактические мероприятия. А если болезнь уже началась, то начать ее лечение на ранних этапах и, соответственно, повысить его эффективность. Кроме того, для супругов – носителей дефектных генов, у которых болезнь никак не проявляется, составление генетических паспортов является надежным методом предупреждения рождения ребенка с наследственным заболеванием.
Микроскопическое исследование
Микроскопическое исследование является неотъемлемой частью общего клинического анализа крови. Во время его выполнения производится подсчет клеток крови (эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов) и оценивается их форма. Объектом исследования является высушенный и окрашенный мазок крови. Этот метод дает очень важную информацию, но если анализировать «живую» каплю крови, то диагностическая ценность микроскопии увеличивается многократно. Проблема в том, что живые клетки содержат слишком много воды, которая слабо поглощает свет, и поэтому являются прозрачными (именно поэтому мазок высушивают, неизбежно деформируя клетки). Увидеть живые клетки можно с помощью фазо-контрастной микроскопии. Дело в том, что они изменяют фазу проходящих лучей света, причем это изменение зависит от толщины и показателя преломления исследуемого объекта. Метод, основанный на регистрации этой разницы, позволяет получать контрастное и четкое изображение и делает видимой структуру клеток крови, дает возможность наблюдать особенности их «поведения», обнаруживать в плазме крови живые клетки микроорганизмов и кристаллы различных соединений. При фазо-контрастной микроскопии капли крови можно увидеть процесс агрегации тромбоцитов, оценить, как ведут себя эритроциты, достаточна ли их подвижность, не объединяются ли они в сладжи (образования, похожие на монетные столбики из клеток). А также обнаружить в плазме крови включения, которых в норме не должно быть (кристаллы холестерина и мочевой кислоты), и клетки бактерий и грибов.